肺炎支原体（ Mycoplasma pneumoniae ， MP ）是柔膜体纲中的支原体目、支原体科、支原体属中的一个种 (1) 。是一类目前所知能独立生活，自行繁殖的最小微生物。支原体感染的范围非常广泛，包括人，动物，植物，昆虫及组织培养的细胞。人体可分离出十几种支原体，其中 5 种对人有致病性。即肺炎支原体、人型支原体、解脲脲原体、生殖支原体、及发酵支原体。肺炎支原体基因组是环状双股 DNA ，分子量为 5 × 10 8 Da ，长度约 835kbp ， G+C 含量为 39% ～ 41% 。 1996 年，首次对肺炎支原体进行了全基因组测序 (2) ，测序株全长 816,394bp ，编码 687 个基因。其基因组大小仅为大肠杆菌的约 1/5 。

•  临床特征：

• 潜伏期 约 2 ～ 3 周（ 8 ～ 35 天）。

• 症状 轻重不一。大多起病不甚急，有发热、厌食、咳嗽、畏寒、头痛、咽痛、胸骨下疼痛等症状。体温在 37 ～ 41 ℃ ，大多数在 39 ℃ 左右，可为持续性或弛张性，或仅有低热，甚至不发热。多数咳嗽重，初期干咳，继而分泌痰液（偶含小量血丝），有时阵咳稍似百日咳。偶见恶心，呕吐及短暂的斑丘疹或 麻疹。一般无呼吸困难表现，但婴儿患者可有喘鸣及呼吸困难。支原体肺炎偶可合并渗出性胸膜炎及肺脓肿，慢性肺部疾患与肺炎支原体间有一定关系。支原体肺炎可伴发多系统、多器官损害，呼吸道外病变可涉及皮肤粘膜，表现为麻疹样或猩红热样皮疹等，偶见非特异性肌痛及游走性关节痛﹔胃肠道系统可见吐、泻和肝功损害﹔血液系统方面较常见溶血性贫血，我们曾见 2 例以溶血性贫血为首发及主诉症状﹔文多发性神经根炎、脑膜脑炎及小脑损伤等﹔心血管系统病变偶有心肌炎及心包炎。细菌性混合感觉亦少见。白细胞高低不一，大多正常，有时偏高。血沉显示中等度增快。

•  X 线检查 多表现为单侧病变，约占 80% 以上，大多数在下叶，有时仅为肺门阴影增重，多数呈不整齐云雾状肺浸润，从肺门向外延至肺野，尤以两肺下叶为常见，少数为大叶性实变影。可见肺不张。往往一处消散而他处有新的浸润发生。有时呈双侧弥漫网状或结节样浸润阴影或间质性肺炎表现，而不伴有肺段或肺叶实变。体征轻微而胸片阴影显著，是本病病特征之一。

• 病程 自然病程自数至 2 ～ 4 周不等，大多数在 8 ～ 12 日退热，恢复期需 1 ～ 2 周。 X 线阴影完全消失，比症状更延长 2 ～ 3 周这久。偶可见复发。

•  流行病学特征

肺炎支原体感染广泛存在于世界各地区，不论热带或寒带，城市或农村均有发生。平时散在性发病，每隔 3 ～ 7 年出现一次地区流行，流行时发病率增加 3 ～ 5 倍。尚未见有肺炎支原体大流行的报道。肺炎支原体感染无明显的季节性，寒冷季节发病率较高，主要原因是冬季室内活动增多，接触密切，空气不流通。肺炎支原体感染可发生于任何年龄，但 6 个月以下婴儿极少患病， 5 岁以下常表现为轻型上呼吸道感染，支原体肺炎好发年龄约为 5 ～ 20 岁，近年来由于托幼机构增多儿童接触机会增加， 5 岁以下儿童支原体肺炎的发病率亦见升高。男女之间发病率无明显区别。本病传染源为急性期患者及痊愈后支原体携带者，健康人很少携带。患者痊愈后肺炎支原体可在咽部存留 1 ～ 5 个月。本病通过飞沫以气溶胶微粒的形式传播，传染性小，与麻疹、流感不同。流行病学观察本病需要长时间密切接触才能感染发病。常以家庭、小学校、学生宿舍、军队营房及监狱为流行单位。由于肺炎支原体生长缓慢，发病潜伏期较长，流行常表现为间歇性发病，长时间缓慢散播的特点。单位内流行可持续数月，地区流行可持续 1 ～ 2 年。

•  菌株保存与复苏

肺炎支原体生长缓慢，一般在固体培养基上不能形成菌苔，在菌种保存时基本采用液体增菌培养。

• 肺炎支原体的抵抗能力：

肺炎支原体对热的抵抗力与一般细菌相似，在 4 ℃ 大约能存活 2 周左右， -20 ℃ 低温下存活 6 ～ 12 个月， -70 ℃ 或冷冻干燥可保存数年或更久。反复冻溶对存活有一定影响。肺炎支原体不耐干燥，主要存活在人的呼吸道黏膜上，在空气中或已干燥的标本中不易分离培养出。肺炎支原体对渗透压敏感，因为无细胞壁，环境中渗透压突然改变可使细胞破裂。同时其对也敏感。

•  培养基和培养条件

肺炎支原体的生长繁殖对培养基要求比一般细菌高，除一般基础营养物质外，尚需要丰富的胆固醇、血清蛋白和酵母浸液，提供其本身不能合成的营养物质。肺炎支原体培养基有固体的、半固体、液体和双相的（固体斜面在底部，上盖液体培养基），肺炎支原体最适宜的 pH 为 7.6 左右。

3. 肺炎支原体培养条件：

培养环境中的温度、湿度、气体和 pH 因素等对肺炎支原体的生长都有重要影响。肺炎支原体适宜的生长温度是 36 ℃～ 38 ℃ ，温度过高或过低都不利于其生长。肺炎支原体不耐干燥，用固体培养时应保持一定的湿度，如果有可调节湿度的培养箱可调节 60% 左右的湿度，如果没有控湿培养箱接种平皿后宜用塑料袋包好，或用胶布密封，以保持湿度，液体或半固体培养时应盖硬胶塞或螺旋塞。肺炎支原体一般大气环境可以生长，但在初次分离的标本和固体培养基培养时含 5% CO 2 及 95% N 2 的气体环境中生长为宜。支原体在液体培养基中生长繁殖达高峰后，若继续培养，会由于培养基 pH 的变化很快死亡，故应该根据培养基颜色变化及时做出判断。

4. 肺炎支原体液体培养特性：

肺炎支原体的繁殖比细菌慢，生长周期为 3 小时左右，以二分裂方式繁殖（图 7.4-1 ）。在液体培养基上的生长曲线与细菌相同，分迟缓期、对数生长期、稳定期和衰老期。快速生长时，细胞质分裂落后于基因组的复制，形成多核丝状体。肺炎支原体液体培养生长后培养基不呈显著的浑浊，可见细菌呈片状薄膜状生长，黏附于管壁或沉于管底，观察时须与未接种管做对比来识别。液体培养基中一般都添加酚红做指示剂来帮助判别生长（图 7.4-2 ）

图 7.4-2 ：肺炎支原体二分裂生长示意图

图 7.4-2 ：肺炎支原体在不同变色液体培养基中生长变色情况

A ：肉汤培养基 左 阴性对照（红色） 右 MP 生长（黄色）

B ： OXOID 变色培养基左 阴性对照（红色） 右 MP 生长（绿色）

5. 分离培养

肺炎支原体常用的标本接种方法有如下几种：

(1) 固体培养基接种法

(2) 液体培养基接种法

(3) 双相培养基接种法

•  形态学特征

肺炎支原体是原核细胞微生物，没有细胞壁。在相差或暗视野显微镜下观察液体培养的支原体，具有高度的多型性，基本形态有球型、双球型及丝状三种，尚有其他不规则形态。图 8-1 为肺炎支原体电子显微镜下形态。肺炎支原体个体微小，能通过 450nm 微孔滤膜，压挤下可通过 220nm 滤膜。肺炎支原体在液体培养中呈滑行运动，滑行速度约为 2 μ m/ 秒。由于没有细胞壁，肺炎支原体革兰染色为阴性。支原体菌落用 Dienes 染色呈蓝色，不易褪色，而细菌（除嗜血杆菌外）一般不易着色，可起到鉴别支原体的作用。

图 8-2 ：电子显微镜镜下肺炎支原体呈现多型性

肺炎支原体在固体培养基上一般 3 ～ 7 天后方能形成集落，直径大约 100 ～ 150 μ m ，典型的菌落一般为圆形，边缘整齐、表面光滑，周遍有一圈薄的透明颗粒区，为菌落在琼脂表面散开生长部分。中央部分较厚，颗粒状，为陷入琼脂内生长部分。肉眼很难观察，必须借助低倍镜观察，典型菌落呈“油煎蛋”样。对于初次分离的菌株培养时一般不出现典型菌落，一般为圆形、隆起、有颗粒状菌落，传代后可出现典型菌落（图 8-2 ）。

图 8-2 ：低倍镜下肺炎支原体菌落

A ：典型“油煎蛋”菌落 B ：原代菌落

•  生物化学鉴定

肺炎支原体由于生长缓慢，在鉴定过程中一般采用快速的分子生物学检测和血清学检测，生化检测使用较少。主要的生化指标见表 9-1 ：

表 9-1 ：肺炎支原体主要生化特性表

利用最广泛的生化特点还是肺炎支原体能够水解葡萄糖产酸，不产气，通过酚红指示剂帮助判别生长。另外肺炎支原体能够还原美蓝使其褪色，培养基中可加入 0.002% 的美蓝观察褪色，同时美蓝还可以抑制口腔、唾液或发酵支原体生长，此法可鉴定肺炎支原体。

•  血清学鉴定

特异性抗体检测：由于肺炎支原体培养需要时间长，限制了它对临床治疗的指导意义，血清学检测成为肺炎支原体检测的重要方法之一。感染后首先出现 IgM 抗体，然后出现 IgG 、 IgA 抗体，一般 IgM 抗体出现后大概 2 周左右才可以检测到 IgG 抗体 (6) 。主要包括：

• 间接血凝试验：微量反应板上先包被抗人 IgM （μ链特异）抗体，加入待检血清，孵育后冲洗，最后加入肺炎支原体致敏的红细胞，即可检出 IgM 抗体。 IgM 抗体出现较早， 40% 患者患病一周即可检测出，提示为近期感染。

•  材料与方法：致敏的羊红细胞，羊红细胞稀释液，阳性血清，阴性血清， V 型微孔血凝板，仪液器，震荡器， 37 ℃ 孵箱。

•  结果判定：

用 + 判定血细胞凝集程度：（ ++++ ）红细胞呈膜片状凝集，布满孔底，有时皱缩成团；（ +++ ）红细胞呈薄层凝集，面积较（ ++++ ）小；（ ++ ）红细胞呈薄层凝集面积较小；（±）红细胞沉于管底，周围不光滑，或中心淡边缘深；（ - ）红细胞完全不凝集，集中沉于孔底呈点状。红细胞凝集程度在（ ++ ）以上判断为阳性，滴度在 1 ： 32 以上有诊断意义。

• 酶联免疫吸附实验（ ELISA ）：本试验敏感性高，可分别检测 IgM 、 IgG 和 IgA 。目前商品化的试剂盒非常多， ELISA 检测是目前血清学检测的主要方法。

•  毒力基因检测

肺炎支原体毒力基因的检测主要包括核酸杂交技术和聚合酶链反应（ PCR ）。

•  核酸杂交技术用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核酸单链通过杂交可探察标本中有无与之互补的目的核酸。由于基因探针技术操作较复杂，敏感性不如 PCR ，同时有潜在的放射性危害，故目前很少使用。

•  PCR 技术在快速检测肺炎支原体中具有非常重要的作用。其可以检测到微量的支原体 DNA ，其方法快速、简便、特异且敏感。对于肺炎支原体感染的早期诊断有极其重要的意义。